13分文献告诉你低起始量样本miRNA测序采用UMI方式建库更好！

Using UMIs, we can collapse the sequencing reads similarly to what is done for mRNA-seq, obtaining quantitative global sRNA expression data. Another benefit of using UMIs is that it allows an unlimited number of PCR amplification cycles, enabling library preparation from low amounts of starting material, which is especially beneficial for clinical purposes.

--Fishman A，《Genome Biol》

血清、血浆、外泌体、脑脊液等等类型的样本，是医学研究中常见的样本类型，特别是在biomarker方向研究中，是常用的临床样本类型。Biomarker研究要求测序筛选得到的候选分子表达量准确，和真实表达不能有太大偏离，但是血清、血浆类样本各种分子（例如miRNA）含量极低，为了满足测序需求需要提高文库构建时PCR循环数，势必导致PCR Duplications增多，数据失真；而降低PCR循环数又容易建库失败，因此是矛盾点。

PCR循环数与PCR Duplications 关系

解决方案是采用UMI（绝对定量）建库！

通过上图可知，随着建库初始RNA量降低，测序数据中miRNA数据体现的表达量远超出真实表达量，而且起始量越低，误差值越大！因此，对于低起始量样本miRNA测序，建议采用UMI方式建库。

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参考文献：

Fishman A, Light D, Lamm AT. QsRNA-seq: a method for high-throughput profiling and quantifying small RNAs. Genome Biol. 2018;19(1):113

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